Приготовление мазков крови, толстой капли и их окраска

Подготовка предметных стекол.

Качество препаратов крови зависит от чистоты предметных стекол, поэтому бывшие в употреблении стекла подвергают специальной обработке. для этого с них предварительно удаляют иммерсионное масло кусочком ваты, смоченной бензином или эфиром, и помещают в теплый 2 % раствор хозяйственного мыла или стирального порошка (2 % раствор стирального порошка готовят путем растворения 20 г его в 975 мл воды с добавлением 20 мл пергидроля), выдерживают в эмалированной посуде 8— 10 ч, старый мазок крови удаляют со стекол ватным тампоном, затем кипятят в этом же растворе в течение 30—45 мин; многократно промывают водопроводной и дистиллированной водой, насухо вытирают.

Затем предметные стекла выборочно проверяют, нанося на них 2— З капли 1 г/л спиртового раствора фенолфталеина; при отсутствии щелочных добавок моющих средств розовое окрашивание не появляется. Подготовленные таким образом предметные стекла помещают в смесь Никифорова, состоящую из равных частей 96 % этанола и диэтилового эфира. Новые стекла достаточно обработать в смеси Никифорова. Подготовленные предметные стекла извлекают по мере необходимости из смеси Никифорова с помощью пинцета, вытирают тряпочкой без ворса и, не прикасаясь к ним руками во избежание загрязнения поверхности, складывают в коробки, чтобы предохранить от пыли.

В начало

Приготовление мазков крови

Мазки крови приготовляют на чистых обезжиренных предметных стеклах, пользуясь шлифованными предметными или покровными стеклами. Край этих стекол должен быть уже поверхности предметного стекла, на котором готовят мазки. В случае необходимости углы шлифованных стекол надпиливают.

Взяв предметное стекло 2 % раствор стирального порошка готовят путем растворения 20 г его в 975 мл воды с добавлением 20 мл пергидроля с находящейся на расстоянии 1—1, 5 см от края стекла каплей крови, в левую руку, располагают его между 1 пальцем с одной стороны и II и III пальцами — с другой так, чтобы капля крови оказалась сверху и справа. Шлифованное предметное или покровное стекло располагают слева от капли под углом 45°, держа его 1 и II пальцами правой руки так, чтобы кончики пальцев касались его длинных ребер.

Продвигают стекло вправо до соприкосновения с каплей крови и тем самым способствуют распределению крови между стеклами. Когда вся кровь распределится между стеклами, достаточно быстро, спокойно и не надавливая продвигают стекло влево до тех пор, пока капля крови не будет исчерпана. Правильно сделанный мазок имеет равномерную толщину, желтоватый цвет, просвечивает и на конце заканчивается щеточкой; он занимает не более 3/4 и не менее 1/2 длины предметного стекла.

Это достигается распределением капли крови, размер которой в диаметре 2—3 мм. Приготовленный мазок подсушивают на воздухе, после чего на его поверхности, ближе к началу мазка, углом предметного стекла или грифельным карандашом надписывают фамилию больного. Из крови каждого больного готовят не менее двух мазков.

В начало

Приготовление толстой капли.

 капли крови, нанесенные на предметное стекло на некотором расстоянии друг от друга, расширяют углом чистого предметного стекла до размера однокопеечной монеты. Маркируют препарат карандашом по стеклу или специальными чернилами. Затем препарат подсушивают на воздухе в течение 1—2 ч. Фиксация мазков крови. до окраски мазки крови необходимо зафиксировать. Унифицированными фиксаторами являются:

1) фиксатор-краситель Мая — Грюнвальда (0, 5 г эозиново-кислого метиленового синего смешивают с 200 мл метанола, раствор готов к употреблению через 4 сут; фиксатор-краситель Мая — Грюнвальда продается также в готовом виде); время фиксации З мин;

2) метанол; время фиксации 5 мин. Фиксацию препаратов крови производят следующим образом. В широкогорлую банку с притертой пробкой, в которую налит один из фиксаторов, устанавливают предметные стекла, сложенные попарно мазками наружу. При большом количестве мазков крови каждую пару предметных стекол захватывают кусочком разрезанной подлиннику полой резиновой трубки, что предотвращает соприкосновение мазков друг с другом. По истечении времени фиксации предметные стекла захватывают пинцетом Корне и располагают на мостике мазками кверху на небольшом расстоянии друг от друга.

Мостик монтируют из двух одинакового диаметра и длины трубок или пипеток, которые соединяют между собой резиновой трубкой; расстояние между параллельно расположенными стеклянными трубками должно быть 5—б см. Мостик укладывают на эмалированный лоток для фиксации препаратов крови можно использовать контейнер для массовой фиксации и окраски. Окраска препаратов крови. для окрашивания фиксированных препаратов крови используют метод Нохта и Паппенгейма.

Окраска по Нохту.

Р е а к т и в ы: 1) 1 г/л водный раствор азура II (1 г красителя растворяют в 1000 мл дистиллированной воды1); 2) 1 г/л водный раствор эозина К (1 г красителя растворяют в 1000 мл дистиллированной воды). Оба реактива можно использовать через 14 дней после приготовления. Хранят их раздельно в посуде из темного стекла с притертой пробкой при ком- 1 дистиллированная вода, используемая для приготовления красителей и смывания краски, должна иметь нейтральную реакцию натной температуре; 3) фосфатный буфер — рН 7, 4— 7, 5 (отдельно растворяют 11, 4 г двузамещенного фосфата натрия 14а2НРОз 2Н20 или 9, 1 г этого же безводного реактива и 4, 9 г однозамещенного фосфата калия без- водного КН2РО4 доводят объем каждого раствора дистиллированной водой до 1 л); 4) метанол. Непосредственно перед употреблением готовят рабочий раствор, смешивая 25 мл 1 г/л раствора азура 11, 20 мл 1 г/л раствора эозина К и 55 мл буферного раствора. Пропорции красителей могут несколько варьировать, поэтому они должны быть установлены опытным путем каждый раз при приготовлении свежей партии растворов азура II и эозина К.

Техника окраски. После фиксации метанолом сухие мазки, разложенные на мостике (или находящиеся в контейнере аппарата для массовой фиксации и окраски), заливают рабочим раствором краски и красят от 20 до 45 мин, затем препараты тщательно смывают водой и высушивают на воздухе; с этой целью препараты ставят в штатив под углом б0—65°.

В начало

Окраска по Паппенгейму.

Реактивы:

1) эозиновокислый метиленовьхй синий по Маю — Грюнвальду;

2) рабочий раствор азур-эозина по Нохту (см. окраску по Нохту).

Мазки фиксируют эозиново-кислым метиленовым синим по Маю — Грюнвальду 3—5 мин, а затем окрашивают по Нохту так, как описано выше. Правильно окрашенные мазки крови имеют розовато-фиолетовый цвет.

В начало

Окраска толстой капли крови.

Толстые капли крови не фиксируют. Предметные стекла с хорошо просушенными толстыми каплями располагают на мостике на некотором расстоянии друг от друга и на 8—10 мин наливают на них рабочий раствор азур-эозина по Нохту.

Происходит <выщелачивание> эритроцитов. Затем краску сливают и на препараты наливают новую порцию рабочего раствора азур-эозина по Нохту на 30—35 мин. Затем предметные стекла осторожно ополаскивают водой и высушивают. лимфоцитов обнаруживается вишнево-красная (азурофильная) зернистость.

Моноцит наиболее крупная клетка, обнаруживающаяся в нормальной крови, округлой или несколько неправильной формы, размером 12— 20 мкм. цитоплазма окрашивается в голубовато-серый цвет и обычно не содержит зернистости. Иногда в цитоплазме обнаруживают мелкую вишнево-красную (азурофильную) зернистость. Ядро различной формы (овальное, водковообразное, грибовидное), окрашивается слабее, чем ядра других видов лейкоцитов.

Плазматические клетки — круглой и овальной формы. Цитоплазма имеет фиалковый оттенок, нередко содержит вакуоли. Ядро чаще расположено эксцентрично. Оно может быть типично лимфоцитарным, иногда с ядрЫишком; реже содержит хроматин, расположенный, как спицы в колесе; в больших по размеру клетках может быть обнаружено крупное ядро, расположенное центрально, хроматин в таких ядрах располагается в виде маленьких пятнышек, выделяющихся на фоне светлой хроматиновой основы.

В начало

Руководство к практическим занятиям по методам клинических клинических лабораторных исследований: Учеб. Пособие -4-е изд., перераб. И доп.-В.С. Ронин, Г.М. Старобинец.-М.: Медицина, 1989.-320с.