Определение белковых фракций сыворотки крови турбидиметрическим (нефелометрическим) методом

Принцип метода заключается в том, что различные белковые фракции сыворотки крови способны осаждаться фосфатными растворами определенной концентрации. При этом образуется очень мелкая взвесь и раствор мутнеет. По степени мутности растворов , устанавливаемой с по iощью фотоэлектроколориметра, судят о концентрации белков в исследуемой пробе.
Реактивы. 1. Основной фосфатный раствор: 33,5 г едкого натра растворяют в 400 мл дистиллированной воды, добавляют 226,8 г фосфорнокислого калия однозамещенного. После растворения охлаждают до комнатной температуры и добавляют дистиллированную воду до объема 500 мл. 2. Рабочие фосфатные растворы. Из основного фосфатного раствора берут в мерные колбы на 100 мл: 92,4 мл (№ 1), 74,9 мл (№ 2), 58,8 мл (№ 3), 48,7 мл (№ 4) и доводят дистиллированной водой до метки. Тщательно размешивают путем встряхивания. При хранении разведенных растворов, чтобы предупредить бактериальное загрязнение, добавляют по 1 капле хлороформа на 100 мл раствора.
Оборудование. Фотоэлектроколориметр; химические пробирки; пипетки на 1, 2, 5 и 10 мл; бюретка на 100 мл; мерные колбы на 100 и 500 ил.
Ход определения. На каждую пробу сьтворотки крови в штатив устанавливают по 6 пробирок, обозначив их цифрами 0, 1, 2, 3, 4 и 5. В пробирку № 0 вносят 10 мл дистиллированной воды, в пробирки № 1, 2, 3, 4 — по 5 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов, в пробирку № 5 — 0,5 мл сыворотки крови, 0,75 мл дистиллированной воды и 3,75 мл основного фосфатного раствора, закрывают пробкой и перемешивают путем перевертывания ее 5—6 раз. Из пробирки 5 переносят по 0,5 мл смеси в пробирки № 1, 2, 3, 4 и 1 мл в пробирку № 0. Содержимое пробирок тщательно, но осторожно перемешивают, избегая образования пузырьков воздуха. Через 15 мин определяют на ФЭКе оптическую плотность (Е) растворов при красном светофильтре в кювете толщиной слоя 1 см. Измерение оптической плотности проводят в обратной последовательности: сначала в пробирке й 4, а затем в пробирках 3, 2 и 1.
Расчет производят по схеме:

  • Е пробирки №1 минус Е пробирки № 2 равно Е альбуминов;
  • Е пробирки № 2 минус Е пробирки № З равно Е альфаглобулинов;
  • Е пробирки №3 минус пробирки№ 4 равно Е бета-глобулинов;
  • Е пробирки 4 равно Е гамма-глобулинов.

Источник: Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочное издание/И.П. Кондрахин, Н.В. Курилов, А.Г. Малахов и дрр. –М: Агропромиздат, 1985.-287с.